ELISA試劑盒實驗步驟多，新手操作者難免出錯。這些錯誤很多都是細(xì)節(jié)不夠造成的。得到世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，減少這種錯誤的方法有很多，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。

大鼠ELISA試劑盒組成結(jié)構(gòu)：

1、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測大鼠ELISA試劑盒結(jié)果必要條件可分為三個：

1、ELISA加樣步驟

在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡,可上下倒置混和，不要在混勻器上強烈振蕩。

制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、待其收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。

一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液、分泌物和排泄物等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保留。

2、固相載體

加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。

良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結(jié)果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定，有些則需經(jīng)預(yù)處理。

3、標(biāo)本因素

血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)留意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。

如在冰箱中保留過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個操縱步驟的留意要點，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，嚴(yán)格遵照劃定操縱，必能得出正確的結(jié)果。